کلونینگ، بیان ژن وتخلیص آنزیم cel iاندونوکلئاز از گیاه کرفس

اهداف: آنزیم i cel یک گلیکوپروتئین گیاهی است که از گیاهان دسته کرفس استخراج می شود و اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصیت بالا در یکی از دو رشته dna برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن، بیان و تخلیص آنزیم cel i اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش یافته در محیط آزمایشگاهی بوده است. مواد و روش ها: در این تحقیق از گیاه کرفس mrna استخراج شد و سپس rt-pcr صورت گرفت و محصول به عنوان الگودر تکثیر pcr مورد استفاده قرار گرفت. ژن در پلاسمید بیانی pet32a ساب کلون شد و درون باکتری e.coli سویه bl2i( de3) plyss ترانسفورم گردید. پروموتور ژن با iptg القا شد و با وسترن بلاتینگ مورد بررسی قرار گرفت. پروتئین با ستون کروماتوگرافی تمایلی ( s.tag / his.tag ) تخلیص شد. همچنین فعالیت اندونوکلئازی آنزیم روی محصول pcr ژن جهش یافته و نرمال در حال بررسی می باشد. یافته ها: کلونینگ ژن با موفقیت انجام شد، پروتئین نوترکیب تخلیص شد و نتایج اولیه نشان دادند که آنزیم می تواند نواحی هترودوبلکس ژن را شناسایی کند. نتیجه گیری: آنزیم cel i نوترکیب می تواند نواحی هترودوبلکس راشناسایی نماید.